參照國家標準GB/T 23527-2009測定蛋白酶活力,稍作修改。先將1%的酪蛋白溶液于40℃水浴5 min。加稀釋3.5倍的胰蛋白酶溶液0.5 mL,于40℃水浴2 min后,加1%的酪蛋白溶液0.5 mL,混勻,然后在40℃下水浴反應10 min,結束后加入1.0 mL三氯乙酸?瞻紫燃尤纫宜嵩偌永业鞍。靜置10 min,12000 r/min離心5 min,取濾液30 μL,碳酸鈉溶液150 μL,福林酚試劑30 μL,40℃恒溫20 min,680 nm下于酶標儀測吸光值。每個樣品做3次平行。
量取胰蛋白酶溶液48 mL,將超聲波發生儀的探頭置于溶液中,探頭沒過溶液2 cm,不接觸溶液底部。超聲參數:間歇比(s)3:3,超聲總時間5 min,超聲功率范圍(75~350 W),初始溫度控制為25℃。超聲預處理完畢后于4℃冰箱放置12 h,測其酶活、熱穩定性、動力學、熱力學、熒光光譜、紫外光譜和紅外光譜。
由于反應物酪蛋白減少量不易測定,因此用產物酪氨酸生成量的變化來反映水解過程
胰蛋白酶活性隨超聲功率的變化曲線如圖1所示。胰蛋白酶活性隨著超聲功率的增加出現波動現象。除了300 W和350 W時,其余超聲功率對胰蛋白酶活性提高都有顯著差異。其中在250 W時,胰蛋白酶活性最高,依次是125 W和175 W。酶活性比未超聲處理的酶活性依次提高26.9%,25.3%和22.2%。
注意:本次使用的超聲波細胞粉碎機為昆山超聲儀器有限公司生產的昆山舒美KBS-150數控超聲細胞粉碎機 http://www.angelotaylorusa.com/KBS-150.html